Enzymaktivitet - Labbrapport

Utdrag

"Metod: För att studera Enzymaktiviteten så använder man en väteacceptor, i detta fatt ska man använda Metylenblått (Mb) när metylenblått tar upp väte övergår den från att vara blå till färglös, med detta kan man se vilken reaktion som sker snabbast dvs den som blir färglös först har mest enzymaktivitet. Metylenblått tar upp väte från FADH2 och oxiderar den till till FAD.
FADH2 + Mb(oxiderad, blå) --> FAD + Mb(reducerad, färglös)

Reaktionen ska ske anaerobt dvs. utan syre för att metylenblått inte ska oxideras efter att den har reducerats. Syre skulle oxidera Mb från red till ox form.
I jäst finns succinatdehydragenas i jäst finns även alla andra enzymer som deltar i citronsyra cykeln och i andningskedjan. Jäst är därmed väldigt praktiskt att använda som enzymkälla för att studera enzymaktiviteten.

Material:
* Provrör
* Termostatbad 40 oC
* Pipetter
* Buffert (pH 7,4)
* Natriumsuccinat (0.2 M)
* Malonsyra (0.4 M)
* Metylenblått (0.1 %) i etanol
* Jästsuspension
* Kokt Jästsuspension
* H2O

Utförande:
* 4 provrör görs i ordning med det innehåll från tabellen. Sedan för in dem i ett vattenbad med et skikt av parafin olja så att inte syre kommer in och reagerar.

PROVRÖR NR 1 2 3 4
Buffert (pH 7.4)cm3 1 1 1 1
H2O cm3 2,5 2,0 - 2,5
Natriumsuccinat, cm3
(substrat) 0,5 0,5 2,5 0,5
Malonsyra cm3
(hämmare) - 0,5 0,5 -
Metylenblått cm3 0,5 0,5 0,5 0,5
Jästsuspension cm3
(succinathydragenas) 0.5 0,5 0,5 -
Kokad jästsuspension cm3 - - - 0.5
Total Volym cm3 5,0 5,0 5,0 5,0

Tiden börjar räknas från det att man har tillsatt Paraffinoljan och lagt rören i vattenbad på ca 40oC tills det att rören har förgats av sig, tidur är inte så behövligt då reaktionen är långsam och kan iakttas med ögat..."... Köp tillgång för att läsa mer Redan medlem? Logga in