Labbrapport: Gelfiltrering - Biologi B

Utdrag

Materiel
Bägare 25cm3, e-kolv 100cm3, 15 numrerade prov(halvmikro), dropprör, pipetter, kolonn packad med t.ex. Sephadex 25, stativ med klämmare och muff

Kemikalier
En (grön) lösning som innhåller gult kaliumkromat(masshalten K2CrO4 ca 2 %) och blått dextran (masshalten dextran ca 2 %), koksaltlösning (masshalten NaCl ca 0,9 %), lättmjölk, Fehlings lösning I och Fehlings lösning II

Utförande
Experiment A: Principen för gelfiltirering
Först monterade vi gelkolonnen lodrätt i ett stativ och tillsatt försiktigt ovanpå gelskitet några cm3 koksaltlösning. Tog vi bort locket nedtill på kolonnen och lät vätskenivån sjunka så att den kommer just ovanför gelytan. Gelen får inte bli torrlagd. Sätt på locket nederst på kolonnen. Tillsatt försiktigt ovanpå gelskiktet 0,5cm3 av den gröna lösningen (som innehåll gula kromatjoner och blå dextranmolekyler). Sedan tog vi locket nederst på kolonnen, då startade filtreringen och därmed samlade vi upp eluatet i en liten bägare.

Experiment B: Gelfiltrering av lättmjölk
Började vi skölja igenom kolonnen med koksaltlösning. Tillsatt försiktigt 1cm3(ca tolv droppar) lättmjölk. Tog vi bort locket nedtill på kolonnen och lät mjölken rinna ned i kolonnen till dess att vätskeytan tangerar gelskiktet. Samtidigt när vi eluerade med koksaltlösning samlade vi upp fraktioner på 1cm3 i 15 numrerade provrör och avbröt vi sedan elueringen genom att sätta på locket under kolonnen. Sedan blandade vi lika mycket volym av Fehling I och Fehling II, tillsatt 6 droppar av blandningen i varje provrör. Efter vi antecknade resultatet ställde vi provrören i ett kokande vattenbad för ca 5 minuter och sedan antecknade vi resultatet... Köp tillgång för att läsa mer Redan medlem? Logga in